（1）外植體的選擇。外植體是指從植物體上切取下來(lái)，用于組織培養(yǎng)的部分，如頂芽、莖尖、側(cè)芽、花器、鱗片等。一般說(shuō)來(lái)帶芽的外植體如莖尖和側(cè)芽等，它們產(chǎn)生幼苗的成功率高，而且很少發(fā)生變異，容易保持材料的優(yōu)良特性。由分化組織構(gòu)成的外植體，如莖段、葉、根、花莖、花瓣、花萼、胚珠、果實(shí)、花粉等，它們大多由已分化的細(xì)胞組成，由它們?cè)偕捎酌?，要有一個(gè)從分化狀態(tài)回復(fù)到分生組織狀態(tài)的脫分化過(guò)程，由這類外植體接種的材料，常常要經(jīng)過(guò)愈傷組織階段再分化出芽或胚狀體而形成幼苗，形成的后代可能有變異。
（2）外植體的滅菌。取得外植體后必須進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌，這是因?yàn)橥庵搀w常常附有多種多樣的微生物，這些微生物一旦被帶進(jìn)培養(yǎng)基，就會(huì)迅速滋生，使組織培養(yǎng)前功盡棄。在將各種微生物殺死或清除的同時(shí)，必須保持外植體的生活力。
先用流動(dòng)的自來(lái)水沖洗10～20分鐘，臟的外植體用洗衣粉洗滌，或用毛刷、毛筆輕輕刷洗，去掉污物，沖洗后用濾紙吸干外植體的表面水分。在70%的酒精里浸泡15～30秒鐘，用無(wú)菌水沖洗兩次。然后用適當(dāng)?shù)乃巹┫?，?jīng)常使用的滅菌劑有次氯酸鈉、過(guò)氧化氫、漂白粉和低濃度的氯化汞等。使用這些滅菌劑，都能起到表面殺菌的作用。具體使用的濃度和浸泡的時(shí)間因外植體的種類和藥劑而定。如用2%～10%次氯酸鈉水溶液浸泡3～15分鐘。滅菌后立即用無(wú)菌水沖洗3～5次，洗去藥液，用無(wú)菌濾紙吸干水分，準(zhǔn)備分離。
（3）外植體的分離。在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行分離。提前15～20分鐘開機(jī)，并用70%的酒精擦拭臺(tái)面。點(diǎn)燃酒精燈用于工具的消毒。如果使用的外植體太小操作困難，可在解剖鏡下進(jìn)行。外植體小的用大頭針將其固定在橡皮塞上，然后在解剖鏡下分離切取。用無(wú)菌刀、剪、鑷子等，在無(wú)菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮等，葉片不需剝皮。然后切成0.2～0.5厘米厚的小片，就可以植入培養(yǎng)基了。在操作過(guò)程中嚴(yán)禁用手觸動(dòng)材料。
（4）外植體的植入。在超凈工作臺(tái)上打開裝有培養(yǎng)基的瓶或試管。在酒精燈的火焰上烤一下瓶口或試管口，再開啟瓶蓋。在無(wú)菌環(huán)境下，將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上，組織培養(yǎng)育苗最常用的培養(yǎng)基為MS。每瓶接種4～10個(gè)。再在火焰上烤一下瓶和瓶蓋。接種后，立即蓋上瓶蓋，試管用無(wú)菌藥棉塞上。及時(shí)寫好記錄，貼上標(biāo)簽。
（5）誘導(dǎo)。消毒后的外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后可誘導(dǎo)出叢芽、胚狀體、原球莖、根狀莖，我們將這些培養(yǎng)材料稱為中間繁殖體。外源的生長(zhǎng)素類物質(zhì)對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞開始分裂效果很好，組織培養(yǎng)育苗是必須使用的。最常用的為6-芐基腺嘌呤，常用濃度為1～2毫克/千克。萘乙酸、吲哚丁酸、吲哚乙酸。后3種藥劑既在配制生根培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)用，又常在誘導(dǎo)、增殖和壯苗時(shí)使用。
（6）中間繁殖體的增殖。對(duì)中間繁殖體進(jìn)行切割、繼代培養(yǎng)就可以進(jìn)行中間繁殖體的增殖。中間繁殖體的增殖速度隨花卉的種類、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件的不同而異，因而對(duì)具體花卉需進(jìn)行試驗(yàn)，找到合適的繁殖條件。當(dāng)中間繁殖體增殖到一定數(shù)量后快速繁殖進(jìn)入生芽、壯苗和生根階段。如果是通過(guò)叢芽繁殖，則不需經(jīng)過(guò)生芽直接進(jìn)行壯苗、生根，如果是通過(guò)其他途徑則需先將中間繁殖體轉(zhuǎn)移到生芽培養(yǎng)基上，然后再轉(zhuǎn)移到壯苗生根培養(yǎng)基上。在壯苗生根培養(yǎng)基上，大多數(shù)花卉要分離成單苗。
（7）生根。繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒(méi)有根，要促使試管苗生根，必須轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基常用1/2MS培養(yǎng)基，無(wú)機(jī)鹽濃度低有利于根的分化。同時(shí)，不同花卉誘導(dǎo)生根時(shí)所需要的生長(zhǎng)素的種類和濃度是不同的，常用生長(zhǎng)素萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸。一般在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)1個(gè)月左右即可獲得健壯根系。
（8）試管苗移栽。對(duì)已經(jīng)生根的試管苗及時(shí)移栽是組織培養(yǎng)育苗的最后工作。由于組織培養(yǎng)苗是在無(wú)菌、有營(yíng)養(yǎng)供給、適合光照、溫度和100%相對(duì)濕度環(huán)境中生長(zhǎng)的，因而剛出瓶的試管苗對(duì)外界環(huán)境不太適應(yīng)，稍有不慎就會(huì)造成大量死苗。出瓶前1～3天打開瓶蓋，讓幼苗鍛煉，適應(yīng)外部不良環(huán)境和對(duì)病菌的適應(yīng)能力，但不能太早，以免培養(yǎng)基生長(zhǎng)霉菌。對(duì)剛出瓶的組織培養(yǎng)苗要細(xì)心管理，控制適當(dāng)?shù)臏囟取⑷豕庹?、較高的空氣濕度、適宜的基質(zhì)及對(duì)病蟲害的有效控制。
（9）操作過(guò)程注意事項(xiàng)。在整個(gè)操作過(guò)程中，工作人員必須用肥皂和流動(dòng)的自來(lái)水把手洗干凈，帶上口罩、帽子，穿上工作服，接種前雙手用70%的酒精擦拭，工作時(shí)不說(shuō)話。
（2）外植體的滅菌。取得外植體后必須進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌，這是因?yàn)橥庵搀w常常附有多種多樣的微生物，這些微生物一旦被帶進(jìn)培養(yǎng)基，就會(huì)迅速滋生，使組織培養(yǎng)前功盡棄。在將各種微生物殺死或清除的同時(shí)，必須保持外植體的生活力。
先用流動(dòng)的自來(lái)水沖洗10～20分鐘，臟的外植體用洗衣粉洗滌，或用毛刷、毛筆輕輕刷洗，去掉污物，沖洗后用濾紙吸干外植體的表面水分。在70%的酒精里浸泡15～30秒鐘，用無(wú)菌水沖洗兩次。然后用適當(dāng)?shù)乃巹┫?，?jīng)常使用的滅菌劑有次氯酸鈉、過(guò)氧化氫、漂白粉和低濃度的氯化汞等。使用這些滅菌劑，都能起到表面殺菌的作用。具體使用的濃度和浸泡的時(shí)間因外植體的種類和藥劑而定。如用2%～10%次氯酸鈉水溶液浸泡3～15分鐘。滅菌后立即用無(wú)菌水沖洗3～5次，洗去藥液，用無(wú)菌濾紙吸干水分，準(zhǔn)備分離。
（3）外植體的分離。在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行分離。提前15～20分鐘開機(jī)，并用70%的酒精擦拭臺(tái)面。點(diǎn)燃酒精燈用于工具的消毒。如果使用的外植體太小操作困難，可在解剖鏡下進(jìn)行。外植體小的用大頭針將其固定在橡皮塞上，然后在解剖鏡下分離切取。用無(wú)菌刀、剪、鑷子等，在無(wú)菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮等，葉片不需剝皮。然后切成0.2～0.5厘米厚的小片，就可以植入培養(yǎng)基了。在操作過(guò)程中嚴(yán)禁用手觸動(dòng)材料。
（4）外植體的植入。在超凈工作臺(tái)上打開裝有培養(yǎng)基的瓶或試管。在酒精燈的火焰上烤一下瓶口或試管口，再開啟瓶蓋。在無(wú)菌環(huán)境下，將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上，組織培養(yǎng)育苗最常用的培養(yǎng)基為MS。每瓶接種4～10個(gè)。再在火焰上烤一下瓶和瓶蓋。接種后，立即蓋上瓶蓋，試管用無(wú)菌藥棉塞上。及時(shí)寫好記錄，貼上標(biāo)簽。
（5）誘導(dǎo)。消毒后的外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后可誘導(dǎo)出叢芽、胚狀體、原球莖、根狀莖，我們將這些培養(yǎng)材料稱為中間繁殖體。外源的生長(zhǎng)素類物質(zhì)對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞開始分裂效果很好，組織培養(yǎng)育苗是必須使用的。最常用的為6-芐基腺嘌呤，常用濃度為1～2毫克/千克。萘乙酸、吲哚丁酸、吲哚乙酸。后3種藥劑既在配制生根培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)用，又常在誘導(dǎo)、增殖和壯苗時(shí)使用。
（6）中間繁殖體的增殖。對(duì)中間繁殖體進(jìn)行切割、繼代培養(yǎng)就可以進(jìn)行中間繁殖體的增殖。中間繁殖體的增殖速度隨花卉的種類、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件的不同而異，因而對(duì)具體花卉需進(jìn)行試驗(yàn)，找到合適的繁殖條件。當(dāng)中間繁殖體增殖到一定數(shù)量后快速繁殖進(jìn)入生芽、壯苗和生根階段。如果是通過(guò)叢芽繁殖，則不需經(jīng)過(guò)生芽直接進(jìn)行壯苗、生根，如果是通過(guò)其他途徑則需先將中間繁殖體轉(zhuǎn)移到生芽培養(yǎng)基上，然后再轉(zhuǎn)移到壯苗生根培養(yǎng)基上。在壯苗生根培養(yǎng)基上，大多數(shù)花卉要分離成單苗。
（7）生根。繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒(méi)有根，要促使試管苗生根，必須轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基常用1/2MS培養(yǎng)基，無(wú)機(jī)鹽濃度低有利于根的分化。同時(shí)，不同花卉誘導(dǎo)生根時(shí)所需要的生長(zhǎng)素的種類和濃度是不同的，常用生長(zhǎng)素萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚丁酸。一般在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)1個(gè)月左右即可獲得健壯根系。
（8）試管苗移栽。對(duì)已經(jīng)生根的試管苗及時(shí)移栽是組織培養(yǎng)育苗的最后工作。由于組織培養(yǎng)苗是在無(wú)菌、有營(yíng)養(yǎng)供給、適合光照、溫度和100%相對(duì)濕度環(huán)境中生長(zhǎng)的，因而剛出瓶的試管苗對(duì)外界環(huán)境不太適應(yīng)，稍有不慎就會(huì)造成大量死苗。出瓶前1～3天打開瓶蓋，讓幼苗鍛煉，適應(yīng)外部不良環(huán)境和對(duì)病菌的適應(yīng)能力，但不能太早，以免培養(yǎng)基生長(zhǎng)霉菌。對(duì)剛出瓶的組織培養(yǎng)苗要細(xì)心管理，控制適當(dāng)?shù)臏囟取⑷豕庹?、較高的空氣濕度、適宜的基質(zhì)及對(duì)病蟲害的有效控制。
（9）操作過(guò)程注意事項(xiàng)。在整個(gè)操作過(guò)程中，工作人員必須用肥皂和流動(dòng)的自來(lái)水把手洗干凈，帶上口罩、帽子，穿上工作服，接種前雙手用70%的酒精擦拭，工作時(shí)不說(shuō)話。
