加入組培圈 · 一起學(xué)組培
南天竹（Nandinadomestica）為小檗科南天竹屬一種，常綠灌木，是觀葉、觀果的優(yōu)良地被和色塊植物。
本文以紅葉南天竹莖尖為試材，篩選出了有效的抑制內(nèi)生菌的抑菌劑和適宜的組織培養(yǎng)基配方，建立了植株再生體系，為南天竹紅葉無(wú)性系快繁奠定了基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1.1 外植體材料及培養(yǎng)條件
1.1.1 外植體選擇
從南天竹實(shí)生苗中選取健康、冬季嫩枝和葉色鮮紅的植株作為實(shí)驗(yàn)材料。
1.1.2 外植體預(yù)處理及消毒
在采芽前1個(gè)月左右每隔7-10天整株噴灑800倍多菌靈，然后采集新枝，剪除上面的羽狀復(fù)葉，用自來(lái)水沖洗干凈，用洗潔精溶液浸泡5-10分鐘，再用自來(lái)水沖洗30分鐘。
將洗干凈的外植體置于超凈工作臺(tái)上，用75%的酒精浸泡20-30秒，倒掉酒精后加入0.1%升汞溶液，蓋上瓶蓋，其間不斷搖動(dòng)溶液，消毒8-10分鐘后倒掉升汞溶液，然后用無(wú)菌水沖洗4-5次，再用無(wú)菌刀剝?nèi)?mm左右大小的莖尖。
1.1.3 培養(yǎng)條件
培養(yǎng)溫度(25±2)℃，光照時(shí)間為12小時(shí)/天，光強(qiáng)1500-2000lx。
2 結(jié)果與分析
2.1 初代誘導(dǎo)培養(yǎng)
將處理好的外植體迅速接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基（配方見(jiàn)文末，下同）中，25天左右莖尖開(kāi)始萌動(dòng)并生長(zhǎng)，50天左右有愈傷組織形成，60天左右愈傷組織中陸續(xù)有不定芽產(chǎn)生。
2.2 繼代增殖培養(yǎng)
誘導(dǎo)培養(yǎng)60天后，將小于0.5cm的不定芽直接轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基，大于0.5厘米新芽(梢)切割成0.5-1.0厘米左右的莖段轉(zhuǎn)接，培養(yǎng)60天。
2.3 內(nèi)生菌抑制措施
植物體中的內(nèi)生細(xì)菌潛伏得較深，表面消毒無(wú)法將其消除。這種污染在外植體初期培養(yǎng)中(前幾代的繼代培養(yǎng))不易被肉眼察覺(jué)，隨著繼代次數(shù)的增加，植株體內(nèi)細(xì)菌逐漸累積，在培養(yǎng)基上顯現(xiàn)出來(lái)。
試驗(yàn)觀察到，南天竹在組培過(guò)程中內(nèi)生菌大體有兩種表現(xiàn)形式：
其一，為接種20天左右培養(yǎng)基表面出現(xiàn)乳白色分布不均的小白點(diǎn)，然后逐漸干縮，與常見(jiàn)的細(xì)菌污染(膿狀)或真菌污染(菌絲)狀表現(xiàn)不同，并且不影響植株生長(zhǎng)，仍能分割繼代培養(yǎng)；
其二，為培養(yǎng)基內(nèi)部接種莖段基部出現(xiàn)呈白色絲狀或片狀污染，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)蔓延至培養(yǎng)基表面，基本不影響植株生長(zhǎng)，但不能用于分割繼代培養(yǎng)。
為了抑制內(nèi)生菌，本試驗(yàn)采用以下兩個(gè)措施：
2.3.1 莖尖大小
選擇新梢部位的莖尖作為外植體，因?yàn)樾律疑L(zhǎng)較快，內(nèi)生菌積累數(shù)量相對(duì)較少，同時(shí)莖尖大小為0.2-0.5厘米，莖尖過(guò)小容易引起褐化；莖尖越大越容易感染內(nèi)生菌。
2.3.2 添加50%多菌靈可濕性粉劑
添加1.5g/L的50%多菌靈可濕性粉劑的培養(yǎng)基上，對(duì)南天竹的內(nèi)生菌抑制有顯著作用。
2.4 經(jīng)壯苗培養(yǎng)后生根培養(yǎng)
將增殖階段3cm以上的嫩莖切下接入壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)30天后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，經(jīng)壯苗培養(yǎng)后，生根率及生根數(shù)比直接生根法都有所提高。經(jīng)低濃度BA刺激后，嫩莖木質(zhì)化程度有所提高，葉片舒張，葉色深綠。
3 討論
南天竹為常綠灌木，在外植體接種時(shí)往往因?yàn)橄静粡氐锥鴮?nèi)生菌帶入培養(yǎng)體系，所以內(nèi)生菌的抑制是南天竹組培的關(guān)鍵。
本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，較高的培養(yǎng)基pH值及一定濃度的細(xì)胞分裂素BA，有利于南天竹的生根。
附配方
誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS + 6-BA 1.0mg/L + IBA 0.1mg/L
增殖培養(yǎng)基：MS + 6-BA 1.5mg/L + IBA 0.1mg/L
壯苗培養(yǎng)基：MS + 6-BA 0.25mg/L
生根培養(yǎng)基：1/2MS + 0.25 mg/L IBA + 0.1mg/L NAA + 0.2g/L AC
以上配方均含3%蔗糖和0.7%瓊脂，pH5.8-6.0（生根培養(yǎng)基的pH值為6.5）。
聯(lián)系客服
