2019年7月4-6日，由中國醫(yī)藥教育協(xié)會主辦，美國感染病學(xué)會（IDSA）、歐洲臨床微生物和感染病學(xué)會（ESCMID）協(xié)辦的第五屆中國教育協(xié)會感染病專業(yè)委員會（IDSC）學(xué)術(shù)大會，暨第十一屆全國侵襲性真菌病實(shí)驗(yàn)室診斷及臨床治療新進(jìn)展研討會，暨2019遼寧省醫(yī)院感染管理質(zhì)量控制中心年會，暨第一屆中國感染疾病大會于大連國際會議中心召開。本次會議由解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心劉又寧教授擔(dān)任大會主席，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院徐英春教授和中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院的陳佰義教授擔(dān)任執(zhí)行主席，浙江大學(xué)邵逸夫醫(yī)院俞云松教授、東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院邱海波教授、北京大學(xué)人民醫(yī)院黃曉軍教授、復(fù)旦大學(xué)抗生素研究所王明貴教授、復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院胡必杰教授、解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心王睿教授、解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心陳良安教授、中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院管向東教授、蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院吳德沛教授擔(dān)任副主席。來自全國各地1300余位感染與微生物、感控專家學(xué)者共赴盛會，進(jìn)行精彩的學(xué)術(shù)交流。
在7月5日的大會報(bào)告環(huán)節(jié)，大會執(zhí)行主席，北京協(xié)和醫(yī)院徐英春教授介紹了“臨床感染性疾病實(shí)驗(yàn)室診斷新進(jìn)展”。
徐英春教授
細(xì)菌耐藥問題嚴(yán)重，迫切需要提升診斷能力
徐英春教授介紹，當(dāng)前，細(xì)菌耐藥問題已經(jīng)成為全球關(guān)注的焦點(diǎn)問題，特別是碳青霉烯耐藥的腸桿菌科細(xì)菌已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康的病原微生物。從2001～2016年間北京協(xié)和醫(yī)院肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐藥率趨勢圖可以看出，從2013年開始，北京協(xié)和醫(yī)院肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐藥率急劇上升，到2016年已達(dá)到14%左右。來自四川大學(xué)華西醫(yī)院鐘志勇教授的一項(xiàng)研究顯示，醫(yī)院內(nèi)感染的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌叢藥物應(yīng)用、實(shí)驗(yàn)室診斷以及護(hù)理成本等多個方面給患者帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。
此外，艱難梭菌也是一種引起廣泛關(guān)注的細(xì)菌。因其每年導(dǎo)致25萬人感染，1.4萬人死亡，10億美元的額外醫(yī)療負(fù)擔(dān)，2013年，美國疾病預(yù)防控制中心（CDC）將艱難梭菌列為“微生物導(dǎo)致公共健康威脅”緊迫級的首位。中國也發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌RT027型患者。這是種高產(chǎn)毒細(xì)菌，繼發(fā)感染可以引起感染性休克，甚至導(dǎo)致患者死亡。
因此，我們迫切需要提升感染性疾病的診斷能力。只有做到早期診斷，早期治療，才能夠有效挽救嚴(yán)重感染患者的生命健康。
當(dāng)前主要的病原微生物檢測方法與技術(shù)
傳統(tǒng)方法
徐英春教授談到，今天雖然涌現(xiàn)出很多新的實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)，但細(xì)菌、真菌、病毒等病原體傳統(tǒng)培養(yǎng)、顯微鏡檢仍是最經(jīng)典、傳統(tǒng)的方法，雖然其耗時，檢出率有限，但仍應(yīng)作為實(shí)驗(yàn)室檢測的基礎(chǔ)。
同時，免疫學(xué)、分子診斷技術(shù)以及質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，使臨床病原微生物檢測能力大大提升，為新發(fā)突發(fā)傳染病病原體精準(zhǔn)診療平臺的建立提供了很好的技術(shù)支撐。
免疫學(xué)方法
在病原微生物免疫檢測方面，主要是以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和膠體金技術(shù)為主的病毒（例如，流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、巨細(xì)胞病毒、細(xì)小病毒B19、柯薩奇病毒、EB病毒、風(fēng)疹病毒、單純皰疹病毒等）抗原和（或）抗體檢測，非典型病原體（例如，肺炎支原體、肺炎衣原體、沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、梅毒、弓形蟲）等的免疫檢測，細(xì)菌感染非特異性免疫檢測（例如，降鈣素原、C反應(yīng)蛋白等）和特異性免疫檢測（例如，艱難所菌GDH＋毒素AB，布氏桿菌虎紅試驗(yàn)＋ IgG，肥達(dá)外斐反應(yīng)，幽門螺桿菌抗體分型，肺炎鏈球菌抗原、A群鏈球菌抗原，嗜肺軍團(tuán)菌IgG、IgM等），非特異性真菌感染免疫檢測 （G試驗(yàn)），念珠菌特異性真菌感染免疫檢測（念珠菌甘露聚糖，念珠菌IgG、IgM），曲霉特異性免疫檢測（GM試驗(yàn)，曲霉IgG、IgM、IgE），隱球菌特異性免疫檢測（隱球菌抗原定性＋定量檢測）。
分子診斷技術(shù)
談及分子診斷技術(shù)，徐英春教授首先介紹了分子測序技術(shù)的發(fā)展史。
徐英春教授談到，分子診斷技術(shù)發(fā)展迅猛，叢1977年第一代測序技術(shù)，到2005年第二代、2008年第三代，以及未來的第四代測序技術(shù)，不斷進(jìn)行更新?lián)Q代，并且不斷應(yīng)用于臨床實(shí)踐，通過數(shù)據(jù)分析，解決臨床問題。
當(dāng)前，二代測序技術(shù)在微生物領(lǐng)域主要有如下用途：
未知病原體鑒定
2014年發(fā)表于《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》的一個病例，記錄了二代測序技術(shù)在臨床應(yīng)用的一個成功案例。1例6周的住院男孩罹患嚴(yán)重腦炎，進(jìn)行38項(xiàng)病原檢測未檢出致病原。發(fā)病48小時時用腦脊液標(biāo)本直接進(jìn)行二代測序，確定為鉤端螺旋體感染，該用青霉素治療，3周后患者出院。
徐英春教授認(rèn)為，這一病例在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》發(fā)表標(biāo)志著新型實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)已成功進(jìn)入臨床應(yīng)用，并能夠提高檢測能力，發(fā)現(xiàn)用過去傳統(tǒng)技術(shù)難以發(fā)現(xiàn)的致病原，解決臨床問題。
對于少見／罕見病原體、新發(fā)、突發(fā)感染性疾病病原體以及難培養(yǎng)的病原體，二代測序技術(shù)具有獨(dú)特的優(yōu)勢，能夠在最短時間內(nèi)準(zhǔn)確獲取病原體的全面信息，對于能否有效控制感染性疾病具有決定性意義。
醫(yī)院感染性疾病暴發(fā)的調(diào)查
應(yīng)用分子診斷技術(shù)有助于追溯感染性疾病暴發(fā)的傳播鏈（患者／環(huán)境），指導(dǎo)、回應(yīng)干預(yù)措施。此外，對于食源性感染暴發(fā)，應(yīng)用二代測序技術(shù)也有助于追溯感染源。例如，2014年，丹麥有41例患者因食用即食肉而感染產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌，17例患者死亡。通過用二代測序技術(shù)分析臨床分離株和食品分離株，發(fā)現(xiàn)均來源于同一家肉制品公司。
病原體毒力分析和耐藥基因檢測
應(yīng)用二代測序技術(shù)有助于預(yù)測感染嚴(yán)重程度和轉(zhuǎn)歸，在疾病早期進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估。
徐英春教授認(rèn)為，如何用好新的分子診斷技術(shù)，讓其在臨床上發(fā)揮更大作用，是非常重要的問題，也是難題。因此，應(yīng)當(dāng)建立適當(dāng)?shù)臋z測流程。
在應(yīng)用二代測序技術(shù)過程中，會遇到很多問題，例如，假陽性／假陰性問題，是感染還是定植？是致病菌還是污染菌？如何在全球范圍內(nèi)共享高質(zhì)量、實(shí)時更新的數(shù)據(jù)庫；與臨床緊密結(jié)合的算法的研發(fā)；以及標(biāo)本采集標(biāo)準(zhǔn)化，等等。
蛋白質(zhì)譜技術(shù)
蛋白質(zhì)譜技術(shù)也是近年來發(fā)展迅速的一項(xiàng)技術(shù)，未來還可能從蛋白質(zhì)譜發(fā)展為核酸質(zhì)譜技術(shù)，目前北京協(xié)和醫(yī)院已經(jīng)開始合作開發(fā)核酸質(zhì)譜，徐教授認(rèn)為，質(zhì)譜技術(shù)未來5年可能出現(xiàn)飛躍。
基于分子診斷和蛋白質(zhì)譜平臺發(fā)現(xiàn)的新病原
最后，徐英春教授介紹了國內(nèi)近年來應(yīng)用分子診斷和質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)的新發(fā)、罕見病原，例如，國際首次發(fā)現(xiàn)并命名人類致病雙相真菌（Emergomyces orientalis），國際首次報(bào)告Candida quercitrusa引起的菌血癥，國際首次報(bào)告Trichosporon dohaense引起的侵襲性感染，國內(nèi)首次報(bào)告Quambalaria cyanescens引起的人類感染，以及國內(nèi)首次報(bào)告Candida parapsilosis暴發(fā)流行。說明新技術(shù)的應(yīng)用大大提高了臨床實(shí)驗(yàn)室病原診斷水平。
小結(jié)
分子診斷技術(shù)使人類更深入地了解微生物的變遷和進(jìn)化，更全面、準(zhǔn)確地描述菌株基因型、毒力、抗生素耐藥和系統(tǒng)遺傳背景等信息；二代測序技術(shù)通過使用獨(dú)特的標(biāo)志物進(jìn)行疫情跟蹤，為院內(nèi)感染暴發(fā)調(diào)查奠定理論基礎(chǔ)。然而，徐英春教授認(rèn)為，二代測序技術(shù)是感染性疾病診療的有力工具，是臨床微生物實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有檢測技術(shù)的重要補(bǔ)充，但不能替代傳統(tǒng)的病原體培養(yǎng)、涂片顯微鏡檢以及抗原抗體檢測等技術(shù)。其實(shí)，每種技術(shù)都在病原體診斷過程中扮演了各自的角色，不能用新技術(shù)完全取代傳統(tǒng)方法。新技術(shù)的出現(xiàn)，是讓我們有更多的手段去進(jìn)行病原體檢測，進(jìn)一步提升診斷能力，最終使患者受益。
